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关于wellclone是什么意思,well是中文意思
1、细胞克隆形成率即细胞接种,表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量。
2、贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆,而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。
3、克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。
4、平板克隆形成和软琼脂克隆形成主要是实验步骤和方法的区别和适用情况的区别。
5、平板克隆形成实验基本步骤:1、取对数生长期的各组细胞,分别用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞,并把细胞悬浮在10%胎牛血清的DMEM培养液中备用。
6、2、将细胞悬液作梯度倍数稀释,每组细胞分别以每皿50、100、200个细胞的梯度密度分别接种含10mL 37℃预温培养液的皿中,并轻轻转动,使细胞分散均匀。
7、置37℃ 5% CO2及饱和湿度的细胞培养箱中培养2~3周。
8、3、经常观察,当培养皿中出现肉眼可见的克隆时,终止培养。
9、弃去上清液,用PBS小心浸洗2次。
10、加4%固定细胞5mL固定15分钟。
11、然后去固定液,加适量GIMSA应用染色液染10~30分钟,然后用流水缓慢洗去染色液,空气干燥。
12、4、将平皿倒置并叠加一张带网格的透明胶片,用肉眼直接计数克隆,或在显微镜(低倍镜)计数大于10个细胞的克隆数。
13、最后计算克隆形成率。
14、克隆形成率 =(克隆数/接种细胞数)×平板克隆形成试验方法简单,适用于贴壁生长的细胞。
15、适宜底物为玻璃的、塑料瓶皿。
16、试验成功的关键是细胞悬液的制备和接种密度。
17、细胞一定要分散得好,不能有细胞团,接种密度不能过大。
18、平板克隆形成试验方法简单,适用于贴壁生长的细胞。
19、适宜底物为玻璃的、塑料瓶皿。
20、试验成功的关键是细胞悬液的制备和接种密度。
21、细胞一定要分散得好,不能有细胞团,接种密度不能过大。
22、软琼脂培养克隆形成试验基本步骤: (1)取对数生长期细胞,用0.25%胰蛋白酶消化并轻轻吹打,使之成为单细胞,作活细胞计数,用含20%胎牛血清的DMEM培养液调整细胞密度至1×106细胞/L。
23、然后根据实验要求作梯度倍数稀释。
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